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常規(guī)的農(nóng)藥殘留分析方法為儀器分析法(農(nóng)藥殘留檢測儀),即利用色譜、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、超臨界流體等技術對農(nóng)藥含量進行快速準確的分析,但這些方法均不能滿足樣品現(xiàn)場快速檢測的要求,這就迫使人們開發(fā)出一些操作方便快捷、結果準確的農(nóng)藥殘留快速檢測技術,包括酶抑制法、免疫分析法、活體生物測定法和生物傳感器法等。
(1)酶抑制法
酶抑制法是利用有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥可特異性地抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶(AChE)的活性,造成神經(jīng)傳導介質(zhì)乙酰膽堿的積累,影響正常傳導,使昆蟲中毒致死這一毒理學原理,將AChE 與樣品反應,如果樣品中沒有農(nóng)藥殘留或者殘留量極少,AChE的活性就不被抑制,反之,如果農(nóng)藥殘留量比較高,AChE的活性就會被農(nóng)藥所抑制。在酶反應試驗中加入底物和顯色劑觀察顏色的變化或測定某種特定化合物反應的物理化學信號的變化,可判斷是否存在有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留。依據(jù)酶抑制法原理設計的農(nóng)藥殘留檢測方法主要有速測卡法(紙片法)、比色法(分光光度法)和膽堿酯酶生物傳感器。
(2)免疫分析法
免疫分析法是利用抗原與抗體特異性結合反應檢測各種物質(zhì)(藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等)的分析方法??乖悄軌蛞鹈庖叻磻姆肿樱切纬商禺愋悦庖叻磻谋貍錀l件。一個完整的抗原應包括2個基本性質(zhì):一是免疫原性;二是反應原性(又稱抗原性或免疫反應性)。具備這2種性質(zhì)為完全抗原,僅具有反應原性的物質(zhì)稱為半抗原。農(nóng)藥是典型的半抗原,只有反應原性而無免疫原性,不能誘導抗體產(chǎn)生,只有將它們與大分子蛋白質(zhì)載體結合,才能刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體。抗原和抗體的制備是免疫分析的關鍵和基礎的步驟。制備抗原時,如果農(nóng)藥分子自身帶有供偶聯(lián)的活性官能團(如氨基、羧基等),則可將農(nóng)藥分子直接與蛋白質(zhì)載體進行偶聯(lián)反應,否則就必須對農(nóng)藥分子進行衍生化,接上供偶聯(lián)反應的活性官能團以合成人工抗原。有許多因素直接影響到能否制備出高質(zhì)量的人工抗原,如選擇合適的中間體、活性官能團引入位點的選擇、半抗原產(chǎn)物的分離、間隔臂的長短、半抗原與載體分子的偶聯(lián)比等。根據(jù)標記物的不同,用于農(nóng)藥殘留分析的傳統(tǒng)免疫分析法主要有4種:放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析/酶聯(lián)免疫吸附分析(EIA/ELISA)、熒光免疫分析(FIA/PFIA)、化學發(fā)光免疫分析(CLIA)。其中,EIA/ELISA 是*為常用的農(nóng)藥殘留檢測方法。 [2]
(3)生物傳感器
生物傳感器是將生物分子識別元件(敏感元件)和信號轉換元件(換能器)緊密結合,從而檢測目標化合物的分析裝置。其基本原理為:待測物質(zhì)和分子識別元件特異性結合,發(fā)生生物化學反應,產(chǎn)生的生物學信息通過信號轉換器轉化為可以定量處理的電、光等信號,再經(jīng)儀表放大和輸出,從而達到分析檢測的目的。酶、抗體(抗原)、全細胞(包括微生物、動植物組織)、基因等生物活性物質(zhì)均可用于生物分子識別元件制作,生物活性材料的固定化技術是制作生物傳感器的核心技術,主要方法有包埋法、吸附法、共價鍵合法、交聯(lián)法、親和法等。信號轉換元件則包括電化學電極和離子選擇性場效應管(ISFET)半導體、光學元件(如光纖、表面等離子共振)、熱學熱敏元件、聲學壓電晶體(如石英晶體微天平、表面聲波)、微機械懸臂梁等。從生物傳感器中生物分子識別元件上的敏感材料角度,可將生物傳感器分類為酶生物傳感器、免疫生物傳感器、全細胞(微生物/組織)生物傳感器、基因生物傳感器。其中,農(nóng)藥殘留快速檢測用途的生物傳感器研究和開發(fā)主要集中在酶生物傳感器和免疫生物傳感器上。 [2]
(4)活體生物測定法
活體生物測定法是利用活體生物對待測樣品進行農(nóng)藥殘留測定,如使用發(fā)光細菌或者昆蟲。 [1]
(5)化學速測法
農(nóng)藥殘留的化學速測法(農(nóng)藥殘留檢測儀)主要是根據(jù)有機磷農(nóng)藥的氧化還原特性。有機磷農(nóng)藥在金屬離子的催化作用下可水解為醇與磷酸,該水解產(chǎn)物與檢測液(含有顯色劑—紫紅色)反應后,使檢測液褪色變成無色。 [4] 此方法的優(yōu)點在于它是化學反應,相對生化反應方法較穩(wěn)定,同時避免了使用酶的不穩(wěn)定、不易保存。用化學方法進行檢測所需反應時間只需3 min(不含前處理時間)。但該方法有時顏色變化不明顯,不利于判斷,同時在使用過程中易受到植物組織和葉綠體的干擾,故只能檢測葉片和果品表面的農(nóng)藥殘留。
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